原理過表達穩(wěn)定細胞系(OverexpressionStableCellLines)的構建利用慢病毒轉染、電轉等技術手段將特定的基因序列整合到宿主細胞的染色體上,使得目的基因能夠在宿主細胞內長期且穩(wěn)定的表達。用途基因功能研究、免疫/殺傷/增殖等、抗體藥物...
注意事項1.病毒包裝的幾個關鍵點主要包括:細胞因素、載體系統(盡量使用成熟的商業(yè)化載體系統)、構建重組的質粒正確與否、質粒抽提純化情況、包裝轉染控制(24、48小時的細胞及熒光狀態(tài)判斷)、目的基因對病毒包裝影響(基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等都會影...
實驗介紹細胞遷移與侵襲實驗將Transwel小室放入培養(yǎng)板中,小室內稱上室,培養(yǎng)板內稱下室,上下層培養(yǎng)液以聚磚酸甜膜相隔,將研究的細胞種在上室內,由于聚碳酸脂膜有通透性,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內的細跑,應用不同孔徑和經過不同處理的聚碳酸脂膜,...
培養(yǎng)細胞不貼壁可能原因1.胰蛋白酶消化過度;2.支原體污染;3.培養(yǎng)基pH值過堿(NaHCO3分解);4.細胞老化;5.接種細胞起始濃度太低或太高。解決方法1.縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度;2.分離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現...
注意事項1.病毒包裝的幾個關鍵點主要包括:細胞因素、載體系統(盡量使用成熟的商業(yè)化載體系統)、構建重組的質粒正確與否、質粒抽提純化情況、包裝轉染控制(24、48小時的細胞及熒光狀態(tài)判斷)、目的基因對病毒包裝影響(基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等都會影...
染方法大致可分為物理介導(如電穿孔法、顯微注射和基因等)、化學介導(脂質體及其代替物、磷酸鈣等)和生物介導(各類病毒,包括腺病毒、慢病毒、逆轉錄病毒、腺相關病毒等)三類途徑。細胞轉染又分為瞬時轉染和穩(wěn)定轉染,瞬時轉染是指外源基因進入受體細胞后,存在于游...
上期我們主要講解了細胞凋亡的早期檢測方法,這期主要講解一下細胞凋亡晚期中,核酸內切酶(某些Caspase的底物)在核小體之間剪切核DNA,產生大量長度在180-200bp的DNA的片段。1、凋亡DNALadder檢測試劑盒細胞經處理后,采用常規(guī)方法分離...
EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復制的DNA分子中,通過基于EdU與Apollo?熒光染料的特異性反應快速檢測細胞DNA復制活性,適用于細胞增殖、細胞分化、生長與...
SPF級SD雄性大鼠,體重約200~220g。使用脂多糖(LPS)誘導建立急性肺損傷模型。將大鼠放入固定盒中,用酒精檫拭大鼠尾靜脈后,按壓住尾靜脈1/3處,注射器進針后回抽有血后注入LPS溶液(溶于生理鹽水,給藥劑量10mg/kg),從而建立內性急性肺損傷大鼠...
1、動物模型名稱:皮膚淺II°及深II°燙傷大鼠模型2、實驗動物種屬:SD大鼠3、實驗動物性別:雌雄不限4、實驗動物年齡:成年5、實驗動物體重:160-200g6、實驗動物環(huán)境:SPF級1、實驗方法:熱力致皮膚損傷法。麻醉大鼠,根據體重腹部備皮,然后固定于實驗...
1、動物模型名稱:固定制動致制動應激大鼠模型2、實驗動物種屬:SD大鼠3、實驗動物性別:雄性4、實驗動物年齡:成年5、實驗動物體重:180~220g6、實驗動物環(huán)境:SPF級。1、實驗方法:采用固定制動方法。大鼠每天固定5~6小時進行制動應激,連續(xù)制動40天。...
不同的誘導劑對應不同的臨床適應癥,我們可以根據實驗需要、技術能力選擇相應的模型,DSS誘導的模型適應與炎癥性腸炎的大多數適應癥,且此模型操作簡單,因此在臨床前和臨床研究中較為常用,但是此模型的成模率、模型穩(wěn)定性差。注意事項1、試劑購買時尤為需要注意的是DSS,...
動物模型很多模型在組織病理上的變化與臨床NASH很相似,但是肝臟的代謝、轉錄特點可能并不一致。因此動物模型不應在組織學上還應該在蛋白質組、脂質組和轉錄組等基礎上評估模型與臨床疾病的相關性。其中一些轉錄組特征包括免疫信號、脂質代謝、糖代謝改變。正常小鼠(比如C5...
是指人類疾病的動物模型。是用人為的方法,使動物在一定的致病因素(物理的、化學的、生物的)作用下,造成動物組織、蝴蝶h或全身一定損害,出現某些類似人類疾病的功能、代謝、形態(tài)結構方面的變化或各種疾病,通過這種手段來研究人類疾病的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律,為研究人類疾病的預防...
動物模型常用的HBV小鼠模型:可簡單分為5類:(1)轉基因小鼠,將HBV基因組片段直接轉入小鼠胚胎中,小鼠模型可終生表達HBV;(2)水動力注射模型,將HBV質粒DNA高壓注射到小鼠體內;(3)AAV載體轉染模型,通過腺相關病毒攜帶HBV基因組進入小鼠的細胞中...
量上容易得到滿足,而且可以通過投服一定劑量的藥物或移植一定數量的等方式,限定可變性,取得條件一致的模型材料。(五)可以簡化實驗操作和樣品收集動物模型作為人類疾病的"縮影",便于研究者按實驗目的需要隨時采取各種樣品,甚至及時處死動物收集樣本,這在臨床是難以辦到的...
的比較研究,可以充分認識同一病原體(或病因)對不同機體帶來的各種損害。因此從某種意義上說,可以使研究工作升畢到立體的水平來揭示某種疾病的本質,從而更有利于解釋在人體上所發(fā)生的一切病理變化。動物疾病模型的另一個富有成效的用途,在于能夠細致地觀察環(huán)境或遺傳因素對疾...
量上容易得到滿足,而且可以通過投服一定劑量的藥物或移植一定數量的等方式,限定可變性,取得條件一致的模型材料。(五)可以簡化實驗操作和樣品收集動物模型作為人類疾病的"縮影",便于研究者按實驗目的需要隨時采取各種樣品,甚至及時處死動物收集樣本,這在臨床是難以辦到的...
目前常用研究AD的實驗動物有非人靈長類動物與嚙齒類動物,在選擇時遵循“減少、替代、優(yōu)化”的3R原則。非人靈長類動物與人類的腦部解剖結構、神經病變特點以及生物行為模式相似,尤其是恒河猴,在其腦中觀察到含有Aβ沉積的老年斑和神經原纖維纏結現象,無論是自發(fā)還是誘發(fā)模...
EdU上的乙炔基能與生物素標記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過一價銅離子的催化發(fā)生共價反應,形成穩(wěn)定的三唑環(huán),該反應非常迅速,被稱作點擊反應(Clickreaction),其反應原理參見圖1。通過點擊反應,新合成的DNA會被相應的生物素探...
1、動物模型名稱:橄欖油聯合酒精致肝硬化門脈高壓大鼠模型2、實驗動物種屬:SD大鼠3、實驗動物性別:雄性4、實驗動物年齡:5周5、實驗動物體重:150g-180g6、實驗動物環(huán)境:SPF級1、實驗方法:橄欖油聯合酒精誘導。按0.3mL/100g體重,背頸部皮下...
傳統的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性,抗原修復,抗原抗體過夜孵育,操作步驟復雜繁瑣。并且由于BrdU抗體分子較大,嵌入DNA分子中的BrdU無法直接與BrdU抗體結合,必須先進行DNA變性操作才能使BrdU抗原表位暴露,但變性的程度可能導致錯誤...
EdU與胸腺嘧啶(T)結構非常相似,而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細胞內很容易擴散,無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免樣品損傷,而且無需抗原抗體反應,能在細胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復制活性。本試劑盒可以檢測到細胞或組織...
2mg組、4mg組、6mg組lh水平均上升,同樣,只有2mg組有明顯升高(p<),如圖3所示。表3表4②體重變化:(mean±sd),如圖4所示:2mg組(連續(xù)注射7天)與空白組相比,大鼠體重***下降(p<,注射第2天開始)。3mg組(連續(xù)注射7天)與空白組...
在一個具體實施方式中,壓迫元件采用黃銅和鋅的混合物制備而成。具體地,混合物為h62黃銅,即含銅量為%~%,余量為鋅含量的黃銅。而銅、鋅皆屬于非鐵磁性物質。在另一個具體實施方式中,壓迫元件采用聚乳酸(polylactic,pla)制備而成。pla是一種無毒無刺激...
建立一種理想的腰椎間盤突出的動物模型對本病的機制研究和臨床防治具有重要意義?,F有模型對腰椎間盤突出癥的模擬均存在明顯不足,或與臨床實際病變部位有一定差距,如慢性坐骨神經結扎模型;或操作難度大,對動物損傷重,如自體髓核移植模型,選擇性神經根結扎模型。因此,急需一...
1、動物模型名稱:FSH聯合HCG致超排懷孕小鼠模型2、實驗動物種屬:KM小鼠或NIH小鼠3、實驗動物性別:雌性4、實驗動物年齡:3~4周齡5、實驗動物體重:16~18g6、實驗動物環(huán)境:SPF級1、實驗方法:注射用重組人促卵泡***(FSH)聯合注射絨促性素...
疾病動物模型和人類的關系科學研究是探索未知,實驗研究的結果往往會出乎意外,不受人為的控制,所以關乎人類本身的研究,在人體上進行試驗,風險很大;對一些數量很少的珍稀動物,或一些因體型龐大,不易實施操作的種類,往往用取材容易,操作簡便的另一種動物來進行實驗研究,代...
MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTTCellProliferationandCytotoxicityAssayKit)是一種非常經典的細胞增殖和細胞毒性檢測試劑盒,被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。MTT可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成...
EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine),中文名為5-乙炔基-2-脫氧尿苷,是一種新型胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷,thymidine)類似物,EdU可以在DNA合成過程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中。另一方面,EdU上的乙炔基能與生物素標記的疊...